日立售后維修-日立超速離心機分離技術(shù)原理
日立超速離心機是通過驅(qū)動轉(zhuǎn)頭高速旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生的離心力場對樣品中不同沉降系數(shù)或浮力密度值的混合物質(zhì)進行快速分離、濃和提純的專門設(shè)備最高轉(zhuǎn)速不低于30000rpm。超速離心技術(shù)廣泛應(yīng)用于大分子、細胞、細胞器等的分離、純化，是生物化學(xué)和分子生物學(xué)不可缺少的技術(shù)手段”。在現(xiàn)代科學(xué)研究中超速離心分離技術(shù)日趨重要。
1超速離心分離技術(shù)原理
超速離心分離技術(shù)在應(yīng)用上可分為制備型超速離心和分析型超速離心兩大類。其中制備型超速離心是濃縮與純化各種粒的最常用方法，而根據(jù)相對離心力與被離心物質(zhì)間的相互作用方式不同，超速離心法可分為差速離心法和密度梯度離心法”。
以日立日立超速離心機為例，其應(yīng)用范圍主要有病毒及亞細胞組份分離蛋白梯度分析脂蛋白分離RNA梯度沉淀質(zhì)粒DNA提純外泌體純化與分析等。以下將著重論述制備型超速離心技術(shù)的應(yīng)用原理。
1.1差速降離心
差速沉降離心利用離心樣品組分中各顆粒的大小和密度不同而存在沉降速度的差別，經(jīng)一定時間的相對離心力作用各顆粒先后沉降以達到分離純化的目的被廣泛應(yīng)用于樣品的粗提純和濃縮。
待分離的顆粒間的沉降系數(shù)差值需足夠大一般為1到幾個數(shù)量級）否則分離效果不佳"離心過程中樣品將分離為兩部分即沉淀物和上清液、取出上清液后可加大轉(zhuǎn)速對上清液進行再離心從而再次得到沉淀和上清液。
如此多次離心處理可完成樣品中不同顆粒的分離。
此法要注意掌握好離心時間和離心力時間過長或相對離心力過大都會造成雜質(zhì)顆粒沉降下來，影響分離效果另外淀于管底的顆粒容易受擠壓而變性失活。所得到的沉淀中會有其他粒不能一次得到純顆粒需對沉淀進行多次再懸浮和再離心才能得到較純的顆粒。差速沉降離心法被廣泛應(yīng)用于各類生物樣品，如血清、血漿、細胞培養(yǎng)液、尿液、唾液和腦脊液等的分析是目前外泌體分離方法的“金標佳W。
1.2密度梯度離心
密度梯度離心是把樣品顆粒加入到有密度梯度的惰性介質(zhì)液（如氯化銫、蔗糖等）中利用顆粒與介質(zhì)的密度值不同在一定的相對離心力作用下使樣品中不同種類粒分別集中到梯度介質(zhì)中某些特定位置上最終得到不同的區(qū)帶從而可以從不同的區(qū)帶中分別收集到純度高的各種顆粒。
本法適用于沉降系數(shù)相差不大的顆粒的分離。如果沉降系數(shù)值相差一個數(shù)量級以上，一般用差速離心法就可以滿足分離需要。
密度梯度離心可一次獲得較純的顆粒，適應(yīng)范圍也較廣既能像差速離心法一樣分離具有沉降系數(shù)差的顆粒又能分離具有一定密度差的顆粒顆粒也能保持活性不會擠壓變形。
同時密度梯度離心中惰性梯度介質(zhì)對流性差從而可以防止分離后的各區(qū)帶間相互混合。但此法需要制備惰性梯度介質(zhì)溶液離心時間一般較長操作也相對復(fù)雜
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