日立超速離心機(jī)售后維修,超速密度梯度離心法
超速密度梯度離心是一種離心分離技術(shù)，它基于樣品中不同成分的密度差異，利用制備的稠密的介質(zhì)溶液在離心管內(nèi)形成連續(xù)或不連續(xù)的密度梯度。當(dāng)樣品在高速旋轉(zhuǎn)的離心機(jī)中受到離心力作用時(shí)，不同密度的成分會(huì)沉降到不同位置，從而實(shí)現(xiàn)分離。
在超速密度梯度離心中，常用的介質(zhì)包括氯化銫、蔗糖和多聚蔗糖等。這些介質(zhì)的主要作用是形成密度梯度，并通過防止液體介質(zhì)對(duì)流混合來確保分離后的各區(qū)帶不會(huì)損壞。
要實(shí)現(xiàn)超速密度梯度離心，超速離心機(jī)是必不可少的。Eppendorf 目前提供落地款 CP-NX 系列超速離心機(jī)和 CS(F)NX 微型超速離心機(jī)，均可用于實(shí)現(xiàn)高效的密度梯度離心實(shí)驗(yàn)，助力優(yōu)質(zhì)產(chǎn)物純化。
超速密度梯度離心法可分為“速率區(qū)帶離心法”和“等密度梯度離心法”兩種。
速率區(qū)帶離心是指顆粒在離心力的作用下，以不同的速度向管底沉降，最終形成區(qū)帶的方法，其分離的方法學(xué)原理主要基于樣本和雜質(zhì)之間的大小和形狀差異；等密度梯度離心法則是利用離心力和浮力達(dá)到平衡的原理，使顆粒在與其密度相等的介質(zhì)中達(dá)到等密度區(qū)帶，其依據(jù)的分離方法學(xué)原理是樣本和雜質(zhì)之間密度的差異。
比如大家所熟知的“DNA半保留復(fù)制”，便是通過等密度梯度離心法被發(fā)現(xiàn)的。
1958年，美國科學(xué)家Matthew Meselson和Franklin Stahl進(jìn)行了一項(xiàng)關(guān)鍵性的實(shí)驗(yàn)。首先，他們利用含15N的NH4Cl作為唯一碳源的培養(yǎng)基來培養(yǎng)大腸埃希菌，使其DNA分子中富含15N同位素。經(jīng)過連續(xù)培養(yǎng)若干代后，大腸埃希菌的DNA就被充分標(biāo)記了15N。
然后，科學(xué)家們將這些標(biāo)記了15N的大腸埃希菌轉(zhuǎn)移到普通培養(yǎng)基（含14N氮源）中繼續(xù)培養(yǎng)。在復(fù)制過程中，新合成的DNA鏈會(huì)包含14N，而原始鏈則保留15N。
培養(yǎng)完畢進(jìn)行等密度梯度離心，由于不同密度的DNA分子被同位素進(jìn)行了標(biāo)記，因此會(huì)根據(jù)其密度的差異在梯度介質(zhì)中沉降到不同的位置。
由于DNA半保留復(fù)制的特性，新合成的DNA分子會(huì)包含一條原始鏈和一條新合成的鏈，
因此，子一代的DNA分子將是一條15N鏈和一條14N鏈的雜合分子，密度介于純15N-DNA和純14N-DNA之間。
這樣的復(fù)制第一代與完全由新鏈組成的DNA分子（第二代）在密度上會(huì)有所不同。因此，在等密度梯度離心后，這些不同密度的DNA分子會(huì)在離心管中形成不同的區(qū)帶。
這種方法的成功應(yīng)用，不僅證實(shí)了DNA的半保留復(fù)制方式，也為后續(xù)的DNA復(fù)制機(jī)制研究提供了重要的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
整體而言，密度梯度離心法廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)等領(lǐng)域，可以分離和純化細(xì)胞、病毒、蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子。
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