近年來，Science、Nature、JEV 等各大期刊上高頻出現(xiàn)的方向之一，正是外泌體。

外泌體是什么？

外泌體（exosome）是由細胞內(nèi)多泡體與細胞膜融合后，釋放到細胞外基質(zhì)中的納米級囊泡。其內(nèi)部可以包裹攜帶 RNA、DNA、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等多種信號分子，表面膜上還有豐富的抗原表達，可以通過循環(huán)系統(tǒng)到達其他細胞與組織，參與細胞間通訊，是一種新型的細胞間信號傳遞的媒介。

外泌體起源于質(zhì)膜循環(huán)途徑中的膜腔或早期胞內(nèi)體，這些膜腔或早期胞內(nèi)體會向內(nèi)凹陷形成管腔內(nèi)膜泡（ILV），進一步發(fā)展成為多泡小體（MVB）完成包裝過程，多泡小體最后在細胞內(nèi)分子馬達的牽引下與細胞表面融合，最終被分泌出去。

外泌體可以用來做什么？

目前已發(fā)現(xiàn)外泌體在腫瘤轉(zhuǎn)移、免疫調(diào)控機制、阿茲海默癥和免疫疾病等疑難雜癥的治療方面嶄露頭角，有望成為多種疾病的早期診斷標志物。

作為人體內(nèi)的一類重要囊泡，外泌體自 2013 年起逐步成為科研熱點。以藥物遞送為例，由于外泌體所固有的長期循環(huán)能力和出色的生物相容性以及諸多優(yōu)點（見下圖），使得其具有很大的潛力成為藥物遞送載體，適合于遞送各種化學物質(zhì)、蛋白質(zhì)、核酸和基因治療劑。

外泌體怎么提??？

獲得高純度的外泌體是開展后續(xù)研究的基礎。目前分離外泌體的方式有許多種，如：

▲ 色譜法

▲ 超濾法

▲ 多聚物沉淀法

▲ 磁珠免疫法等

但超速離心法仍舊是業(yè)內(nèi)推崇的外泌體分離金標準，這是因為超速離心法可以準確地重復獲取外泌體，同時最大限度減少蛋白質(zhì)聚集體和雜質(zhì)離子的共純化現(xiàn)象。

如果選擇超速離心法，那么可以依托日立超速離心機，來獲取更高純度的外泌體。

基于超速離心法的CP100NX 外泌體分離方案

上面的表格中已經(jīng)提到，依托于超速離心機的外泌體分離方案大致有兩種：分別是差速離心法和密度梯度離心法。

其中密度梯度離心法可以成功地將亞細胞成分（例如過氧化物酶體，線粒體等）分離到密度梯度溶液中的不同層中。外泌體粗提樣品被放置在梯度液頂部，當施加離心力時，樣品中的顆粒以特定的速率通過梯度，該梯度以從上到下的密度增加。

樣品中的外泌體將在 1.15-1.19 g/mL 的密度范圍富集，隨后可以通過分餾收集。密度梯度超速離心對從蛋白質(zhì)聚集體和非膜顆粒中分離出外泌體非常有效。在日常分離中，兩種離心方法可以搭配使用，會有助于獲取更高純度的外泌體。

分離外泌體流程（超速離心法）

1. 收集對數(shù)生長階段的細胞培養(yǎng)上清或組織液

2. 多功能臺式離心機，去除死細胞、生物聚集體和大型囊泡等

500 xg,10min；2000 xg,10min; 10,000 xg,30min, 4℃

3. CP100NX 超速離心機，差速離心法初步富集外泌體

100,000 xg, 2h, 4℃；P70AT 固定角轉(zhuǎn)

4. CP100NX 不連續(xù)密度梯度離心，進一步純化外泌體，回收 1.15-1.19 g/ml 介質(zhì)液

100,000 xg, 16h, 4℃；P32ST 水平轉(zhuǎn)子

5. 日立CP100NX 超速離心機，溶劑置換

100,000 xg, 1h, 4℃

外泌體超速離心制備推薦方案

Eppendorf 超速離心機 CP100NX ? P70AT 固定角轉(zhuǎn) ? P32ST 水平轉(zhuǎn)子

它具有以下特點幫助外泌體制備：

▲ 直觀：前置 47cm LED 顯示條，通過顏色/發(fā)光模式，運行狀態(tài)一目了然。

▲ 簡便：智能模塊化 LCD 觸屏操作鍵面，參數(shù)設置，運行操作，輕松自如。

▲ 安全：不平衡檢測及轉(zhuǎn)子壽命管理，真實記錄轉(zhuǎn)子運行時間，確保運行安全。

▲ 省心：高效制冷系統(tǒng)，呵護外泌體等樣品，ECO 節(jié)能模式，待機電耗最高省 50%。

外泌體的分離雖然復雜，方法多樣，耗時也較長，但如果能優(yōu)化分離方法，相信在日常的實驗研究中，也能獲得更好的優(yōu)化提升。